Biotin-PFP（生物素-五氟苯酯）是一種高活性生物素衍生物，它將生物素的高特異性親和識(shí)別能力與五氟苯酯（PFP）的強(qiáng)反應(yīng)活性相結(jié)合，成為生物分子偶聯(lián)、標(biāo)記及純化中的重要工具試劑，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)及藥物研發(fā)領(lǐng)域。以下是對(duì)其核心特性的詳細(xì)闡述：

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成

• 生物素模塊：屬于維生素B族成員，與親和素、鏈霉親和素形成較強(qiáng)的非共價(jià)結(jié)合（解離常數(shù)Kd≈10?1? M），是后續(xù)靶向捕獲、檢測(cè)、純化的核心單元。

• 五氟苯酯模塊：含五個(gè)氟原子的高活性酯基團(tuán)，強(qiáng)親電性使其能高效捕捉氨基（優(yōu)先伯胺）或羥基，在溫和條件下形成穩(wěn)定的酰胺鍵或酯鍵，是實(shí)現(xiàn)與生物分子共價(jià)偶聯(lián)的關(guān)鍵。

二、物理性質(zhì)

• 外觀：白色至淡黃色粉末。

• 熔點(diǎn)：190.0~194.0℃。

• 沸點(diǎn)：555.3±50.0℃（預(yù)測(cè)值）。

• 密度：1.441。

• 溶解性：通常需用無(wú)水有機(jī)溶劑（如DMF、DMSO）溶解，因其對(duì)水和氧氣較為敏感，易發(fā)生降解。

• 儲(chǔ)存條件：需在-20℃、避光、干燥的惰性氣體（如氬氣）保護(hù)下儲(chǔ)存，以保證其穩(wěn)定性和活性。

結(jié)構(gòu)式：

三、反應(yīng)特性

• 高反應(yīng)活性：PFP基團(tuán)在溫和條件下（如pH 7-9、室溫至37℃）即可與生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸、多肽）的氨基或羥基快速反應(yīng)，形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵。

• 反應(yīng)選擇性：優(yōu)先與伯胺反應(yīng)，生成酰胺鍵，適用于蛋白質(zhì)N端或賴(lài)氨酸側(cè)鏈的標(biāo)記。

• 穩(wěn)定性：形成的生物素標(biāo)記產(chǎn)物在多種緩沖液和儲(chǔ)存條件下（如-20℃）可長(zhǎng)期保持活性。

四、應(yīng)用場(chǎng)景

• 蛋白質(zhì)修飾與標(biāo)記：

• 用于蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記、酶標(biāo)記或親和純化。例如，通過(guò)PFP-Biotin標(biāo)記抗體后，可利用鏈霉親和素磁珠進(jìn)行免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。

• 結(jié)合生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)復(fù)合物的富集與分析。

• 核酸標(biāo)記：

• 修飾寡核苷酸或RNA，用于原位雜交（ISH）、熒光原位雜交（FISH）或核酸pull-down實(shí)驗(yàn)。

• 作為高通量測(cè)序的接頭或探針的標(biāo)記物，提高檢測(cè)靈敏度。

• 細(xì)胞表面標(biāo)記與追蹤：

• 標(biāo)記細(xì)胞表面受體或抗原，結(jié)合熒光標(biāo)記的鏈霉親和素進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)或顯微鏡觀察。

• 通過(guò)生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的長(zhǎng)期追蹤和示蹤。

• 藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證：

• 標(biāo)記藥物分子或探針，研究其與靶標(biāo)的結(jié)合特性。

• 生物傳感器開(kāi)發(fā)：

• 利用生物素-鏈霉親和素的高親和力，構(gòu)建高靈敏度的生物傳感器。

• 藥物遞送系統(tǒng)：

• 將生物素偶聯(lián)到藥物載體表面或納米顆粒上，通過(guò)親和素橋接實(shí)現(xiàn)靶向遞送或多功能載體構(gòu)建。

五、特點(diǎn)

• 高偶聯(lián)效率：PFP活性酯端可快速與氨基反應(yīng)，生成穩(wěn)定共價(jià)鍵。

• 特異性強(qiáng)：對(duì)氨基或羥基高度選擇性，減少副反應(yīng)。

• 生物素識(shí)別能力：與親和素結(jié)合力高，適用于多種免疫分析與檢測(cè)平臺(tái)。

• 多功能應(yīng)用：蛋白質(zhì)偶聯(lián)、抗體標(biāo)記、藥物載體修飾及傳感器構(gòu)建。

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